Conţinut
- TL; DR (Prea lung; nu a citit)
- Ce este electroforeza?
- Pregătirea nesatisfăcătoare a gelului
- Prea multă probă
- Proba de calitate slabă
V-ați întrebat vreodată cum studiază oamenii de știință fragmente minuscule precum ADN-ul dvs.? O metodă este electroforeza cu gel. În timp ce electroforeza produce, de obicei, benzi clare, ușor de citit, perfecte pentru interpretarea științifică, rezultatele distruse uneori întunecă datele.
TL; DR (Prea lung; nu a citit)
Electroforeza cu gel permite oamenilor de știință să vizualizeze probele digerate și să măsoare dimensiunile fragmentelor. Smearing rezultă din geluri de agaroză preparate necorespunzător, încărcarea unui eșantion nediluat în puțuri sau utilizarea probelor de proastă calitate.
Ce este electroforeza?
Electroforeza cu gel este o modalitate pentru oamenii de știință de a vizualiza probele digerate de molecule mici, cum ar fi ADN-ul și de a estima mărimile acelor fragmente. Pentru a efectua electroforeza, oamenii de știință pregătesc un gel suspendând agaroza în apa clocotită. Polimerizarea rezultată produce polimeri de zahăr încrucișat, astfel încât gelul să semene cu o pânză de păianjen la nivel chimic.
Oamenii de știință folosesc un instrument de tăiere pentru a forma puțuri în gel, astfel încât să poată încărca cantități foarte mici de probe digerate în puțuri. Pornirea mașinii face ca energia electrică să treacă prin gel, iar fragmentele din eșantioane încep să călătorească din fântâni spre cealaltă parte a gelului. Întrucât gelul este ușor, fragmente mai mici călătoresc prin matrice rapid, în timp ce fragmente mai mari durează mai mult pentru a se urca prin matrice. Când s-a terminat, gelul conține benzi întunecate reprezentând cât de departe au parcurs diferite fragmente. Oamenii de știință măsoară aceste benzi și folosesc un calcul logaritmic pentru a determina dimensiunea fiecărui fragment în funcție de cât de mult a migrat.
Oamenii de știință speră pentru trupe clare, dar uneori frotiile de trupă. Această frotiere este de obicei rezultatul gelurilor slab preparate, încărcării probelor nediluate în puțuri sau mostre de proastă calitate.
Pregătirea nesatisfăcătoare a gelului
Când vine vorba de rezultate distruse, un vinovat probabil este un gel slab pregătit. Un gel satisfăcător polimerizează uniform, producând o matrice uniformă pe întregul gel din tava de turnare. Dacă o parte a gelului - de obicei jumătatea inferioară - se stabilește înainte ca omul de știință să termine să toarne întreaga tavă, gelul rezultat va fi inegal și va da rezultate distruse.
Prea multă probă
Înainte de a încărca probe în puțuri, probele respective trebuie să fie suficient de diluate pentru a trece prin gel, fără a revărsa sondele. Dacă un eșantion încărcat este prea concentrat, deoarece omul de știință a uitat să-l dilueze sau a folosit un factor de diluare necorespunzător, fragmentele vor fi prea mari pentru puțuri și vor produce pete.
Proba de calitate slabă
Epuizarea rezultă, de asemenea, din calitatea proastă a eșantionului. De exemplu, un eșantion de ADN contaminat cu proteine sau care conține prea multă sare poate produce apariție. Probele degradate sau denaturate dau, de asemenea, rezultate slabe, inclusiv benzi rupte.
Electroforeza cu gel este o modalitate uimitoare pentru oamenii de știință de a vizualiza probele digerate și de a determina dimensiunea fragmentului. Pregătirea atentă atât a gelului, cât și a probei reduce la minimum posibilitatea de pulverizare și produce benzi clare ideale pentru interpretarea științifică.