Conţinut
Unul dintre modurile clasice de a determina concentrația de microbi dintr-un eșantion este de a dilua proba, de a crește microbii pe plăci și de a număra coloniile. Microbii placați cresc dintr-o unitate formatoare de colonii formată dintr-una sau mai multe celule într-o colonie vizibilă care poate fi văzută și numărată. Bacteriile sunt cel mai frecvent microb de evaluat folosind numărul de plăci. Numărul de colonii este folosit pentru a detecta și număra microbii din sol, apă și alimente. Protocoalele pentru numărarea coloniilor subliniază o abordare precisă și metodică.
Probele de diluare, placare și incubare
Dacă pur și simplu frotați un eșantion de microb pe o placă de agar, veți vedea atât de multe unități formatoare de colonii încât coloniile individuale se vor amesteca împreună, ceea ce le face imposibile de numărat. Pentru a rezolva această problemă, amestecați proba într-un mediu lichid, luați o cantitate mică din amestecul respectiv și diluați-o în continuare. Repetați acest proces de șase până la 10 ori. Întindeți diluția finală pe o placă de agar și incubați-o timp de patru până la șapte zile înainte de a număra coloniile.
Număr manual
Trucul principal în numărarea coloniilor este de a număra fiecare punct de colonie o dată. O abordare este de a seta vasul Petri pe un fundal de grilă și de a număra coloniile din fiecare celulă grilă, mișcându-se într-un model metodic prin toate celulele. Marcarea coloniilor numărate pe spatele vasului Petri poate fi, de asemenea, o abordare utilă. În general, va trebui să numărați cel puțin trei plăci; utilizați numai plăci care conțin 30 până la 300 de colonii pentru a face inferențe solide, sugerează rețeaua de microbiologie, o firmă care oferă servicii de consultanță laboratorilor și producătorilor. Plăcile cu colonii care sunt prea numeroase pentru a număra sau cu prea puține colonii trebuie să fie retratate dintr-o nouă diluție.
Numărare automată
Eroarea umană se adaugă la timpul implicat în numărarea coloniilor manual. Pentru a îmbunătăți atât precizia, cât și eficiența, așezați vasul Petri într-un dispozitiv de numărare automată a coloniilor. Contoarele automate de colonii iau o imagine a farfuriei, separă coloniile de fundal și apoi folosesc un algoritm pentru a număra coloniile pe farfurie. Algoritmii pot avea dificultăți în diferențierea coloniilor atunci când două sau mai multe colonii se ating la margini, deci aceasta este o zonă de dezvoltare software continuă.
Facând numărarea mai complicată
Precizia calculării densității microbilor din numărul de colonii are unele limitări. Unitățile care formează colonii pot fi o singură celulă, un lanț de celule sau un grup întreg de celule. Presupunerea este că o colonie reprezintă o celulă, deci concentrațiile calculate din numărul de colonii pot fi mici. Diferiți microbi au nevoie de condiții de creștere diferite, iar coloniile de pe placă reprezintă doar acei microbi care prospera pe acel mediu de creștere în acele condiții de incubație. În plus, numărarea coloniilor nu înregistrează celule moarte, o considerație importantă atunci când aveți nevoie de concentrația de celule din eșantionul inițial.