Conţinut
Oamenii de știință folosesc diluții seriale (o serie de diluții de 1:10) pentru a calcula densitatea populației culturilor bacteriene. Când o picătură de cultură care conține un număr mic de bacterii este placată și incubată, teoretic fiecare celulă va fi suficient de departe de alte celule încât își va forma propria colonie. (În realitate, unele colonii pot fi descendenți a două celule din apropiere, dar acest lucru este rar în culturile diluate, deci numărul de colonii este o estimare foarte bună a numărului de celule transferate inițial pe placă.) Deoarece densitatea populației este necunoscut, trebuie să se utilizeze o varietate de diluții pentru a ajunge la o placă cu un număr adecvat de colonii.
Diluții seriale
Etichetați cele șase epruvete (fiecare conținând 9 ml de mediu de creștere) ca 1 până la 6. Etichetați cele șase plăci de agar ca 1 până la 6. Folosiți un pipetter și vârfuri de pipetă sterile de 1 mililitru (mL) pentru a transfera 1 mL de cultură bacteriană în tub 1.
Amestecați bine și transferați 1 ml din tubul 1 în tubul 2 folosind un pipetter și vârfuri sterile de 1 ml.
Repetați etapa 2 pentru tuburile rămase, transferând de fiecare dată 1 ml de la cel mai recent tub utilizat la următorul tub.
Folosiți un pipetter și vârfuri sterile de 0,1 ml pentru a transfera 0,1 ml de la tubul 1 la o placă de agar. Flacărați o tijă de sticlă în formă de L și folosiți-o pentru a răspândi uniform picăturile în jurul plăcii. Incubați placa timp de 48 de ore la o temperatură adecvată pentru bacteriile utilizate. Diferite tipuri de bacterii au diferite temperaturi optime de creștere. Dacă nu găsiți temperatura optimă de creștere folosind material de referință, încercați să incubați plăcile la 25 și 37 de grade.
Repetați etapa 4, de fiecare dată când transferați lichidul dintr-o eprubetă diferită pe placa corespunzătoare.
Calcule ale populației
Observați cele șase plăci și alegeți-le cu 30 până la 200 de colonii izolate.
Înmulțiți numărul de colonii de pe placă cu 10 pentru a calcula numărul de celule pe ml de cultură din tubul de diluție utilizat.
Înmulțiți numărul de la pasul 2 cu 10 ^ (numărul plăcii) pentru a calcula numărul de celule pe ml de cultură inițială. Valoarea de 10 ^ (numărul plăcii) este factorul de diluare al culturii utilizate pentru a innoca această placă.