Conţinut
Cromatografia lichidă de înaltă performanță este o tehnică pentru analiza de laborator a unui amestec. Este un tip eficient de cromatografie care folosește presiune înaltă, mai degrabă decât pur și simplu gravitația, pentru a propulsa o probă dintr-un amestec printr-o coloană. Se injectează o probă, apoi o pompă care conține cantități mari de presiune ajută la deplasarea eșantionului de-a lungul unei coloane ambalate, unde este separată în componente individuale. Această separare este apoi analizată de un detector pentru a da rezultate.
Site de injectare
Pentru a fi injectat într-un HPLC, mai întâi, o probă trebuie dizolvată într-un solvent lichid polar, de preferință cu spectre HPLC cunoscute, astfel încât datele sale să poată fi diferențiate de probe. Soluția lichidă care conține proba este introdusă în instrument și este trimisă în coloană. Locația reală a locului de injecție depinde de marca instrumentelor. În cele mai multe cazuri, procesul de injecție este automatizat, dar în unele cazuri, un lucrător de laborator trebuie să injecteze proba folosind un ac mic pentru seringă.
Componenta pompei
Componenta pompei a unității HPLC este necesară deoarece asigură presiunea care propulsează proba prin coloană. Rezistența pompei variază, dar una puternică poate produce o presiune de până la 6.000 psi sau lire sterline, care se aplică după injectarea eșantionului. Acest lucru permite eșantionului să treacă prin coloană mai rapid și mai eficient decât dacă s-ar scurge folosind doar forța gravitației.
Descrierea coloanei
Viteza crescută a unui eșantion trecut prin coloană de către o pompă permite utilizarea unui alt tip de coloană decât cele utilizate în cromatografia lichidă simplă. Materialul de ambalare din coloană poate avea o dimensiune a particulelor mult mai mică, ceea ce crește suprafața și, prin urmare, ajută interacțiunile probei cu coloana. Majoritatea coloanelor HPLC funcționează prin polaritate. Proba este dizolvată într-un solvent polar, iar coloana este formată din hidrocarburi nepolare în mare parte. Părțile polare ale moleculei eșantionului trec foarte rapid prin coloană, deoarece interacționează în primul rând cu solventul, în timp ce eșantioanele componente nepolare rămân în coloană, formând interacțiuni slabe cu componentele coloanei. Prin urmare, componentele eșantioanelor ies din coloană în ordine de la cele mai polare la cele mai nepolare.
Funcția detectorului
Detectoarele, de asemenea, variază în funcție de tipul de instrument HPLC utilizat. Cu toate acestea, majoritatea funcționează în același mod de bază. O sursă de lumină ultravioletă strălucește pe componentele probei separate, pe măsură ce ies din coloană. Majoritatea compușilor organici absorb o anumită cantitate de lumină, așa că, pe măsură ce trec de fasciculul de lumină aplicat, un detector poate ridica câtă lumină este absorbită. Detectorul înregistrează, de asemenea, timpul de reținere a componentelor în funcție de ordinea în care ies din coloană. Această ieșire poate fi apoi analizată pe baza zonei de vârf pentru a determina natura exactă a componentelor probelor.