Conţinut
Escherichia coli, E. coli, este o bacterie care crește în intestinele inferioare ale mamiferelor. Această bacterie a fost descoperită pentru prima dată la sfârșitul anilor 1800. De atunci, a avut o lungă istorie de utilizare în cercetarea științifică. Este cel mai utilizat organism în genetica moleculară. O parte din motivul pentru care E. coli este frecvent utilizat în cercetarea științifică este faptul că este ușor să crești într-un laborator. Factorii care fac ca E. coli să crească ușor sunt nevoile sale nutritive simple, rata de creștere rapidă și cerințele sale de întreținere moderate.
Sterilizați bucla de inoculare punând-o în flacăra arzătorului Bunsen. Treceți jumătatea inferioară a buclei prin flacără până devine roșu.
Lăsați bucla să se răcească. Puteți să-l atingeți la agarul steril de pe placă pentru a vă asigura că s-a răcit. Nu așezați bucla pe masă și nu lăsați-o să contacteze altceva decât agar steril sau cultura dorită acum, după ce a fost sterilizată.
Introduceți bucla în cultura E. coli și apoi eliminați-o.
Deschideți placa de agar și glisați ușor bucla înainte și înapoi pe suprafața unei secțiuni a agarului. Aveți grijă să nu se zgârie prin agar cu bucla. Agarul oferă substanțele nutritive de care E. coli trebuie să crească.
Puneți din nou bucla în flacăra arzătorului Bunsen pentru a o steriliza. Odată ce tija buclelor se răcește, atingeți-o într-o secțiune sterilă a plăcii pentru a vă asigura că este răcoroasă, apoi glisați bucla prin prima dungă pentru a face un al doilea șir. Acest al doilea șir este o versiune diluată a primului șir. Repetați acest proces de sterilizare și alunecare până când au fost glisate mai multe secțiuni ale plăcii de agar. Motivul pentru care faci acest lucru este astfel încât să poți alege mai târziu din colonii unice, clonale. Acest lucru vă va ajuta să vă asigurați că aveți cel puțin o secțiune care are colonii individuale - nu prea concentrată (care va avea o creștere prea mare și nu vă va permite să alegeți dintr-o singură colonie) și nu prea diluată (ceea ce nu ar da colonii) .
Sterilizați bucla în flacără ultima dată înainte de a o pune deoparte în zona de lucru.
Puneți partea superioară înapoi pe placa de agar. Rotiți placa cu capul în jos și așezați-o în incubatorul setat la 37 de grade Celsius (98,6 grade Fahrenheit). Această temperatură ideală de incubare simulează temperatura corpului uman unde se află E. coli. În 24 până la 48 de ore, pe placa de agar vor apărea colonii vizibile de bacterii E. coli.