Conţinut
Izolarea bacteriilor de sol este un prim pas important în multe experimente de microbiologie. După ce sunt izolate, bacteriile pot fi analizate în continuare pentru a determina lucruri, precum speciile și funcția lor în mediul solului. Chiar și o cantitate minusculă de sol poate conține milioane de bacterii, ceea ce face necesară diluarea unui eșantion de sol înainte de izolarea bacteriilor de la probă.
Măsurați 100 ml. apă distilată în cilindrul gradat și se adaugă la sticla sterilă.
Se cântărește 1 g de probă de sol și se adaugă în sticla de apă distilată.Strângeți bine sticla și agitați-o pentru a amesteca bine soluția.
Etichetați epruvete sterile "10 ^ -3," "10 ^ -4", "10 ^ -5" și "10 ^ -6." Adăugați 9 ml de apă distilată în fiecare dintre tuburi, folosind una dintre pipete.
Transferați 1 ml soluție în flacon în tubul etichetat "10 ^ -3", folosind o pipetă nouă. Se acoperă tubul și se răstoarnă ușor până când soluția este bine amestecată.
Transferați 1 ml de soluție în eprubetă "10 ^ -3" pe tubul "10 ^ -4" cu o pipetă nouă. Acoperiți tubul „10 ^ -4” și turnați să se amestece. Repetați această metodă pentru a transfera soluția din tubul "10 ^ -4" în tubul "10 ^ -5" și apoi din tubul "10 ^ -5" în tubul "10 ^ -6".
Placați trei probe fiecare din tuburile "10 ^ -4", "10 ^ -5" și "10 ^ -6". Folosiți o pipetă nouă pentru a transfera 1 ml de soluție din tub într-o placă Petri. Se adaugă aproximativ 15 ml de agar nutritiv pe farfurie; apoi puneți capacul pe farfurie și rotiți ușor, astfel încât agarul acoperă partea inferioară a plăcii.
Faceți o placă de control introducând 1 ml de apă distilată într-o placă Petri, folosind o pipetă nouă. Adăugați agar; puneți capacul și rotiți farfuria.
Lăsați plăcile Petri în poziție verticală până când s-a stabilit agarul. Apoi inversați plăcile și incubați-le - fie într-un incubator, fie la temperatura camerei - timp de cel puțin 24 de ore și până la cinci zile.
Scoateți plăcile din incubator după cantitatea dorită de timp de incubație. Numărați coloniile bacteriene pe plăci care conțin aproximativ 30 până la 300 de colonii. Utilizați un marker permanent pentru a marca coloniile pe care le-ați numărat deja pentru a evita să numărați de două ori aceleași colonii.
Împărțiți numărul de colonii numărate prin diluare - „10 ^ -4,„ „10 ^ -5” sau „10 ^ -6” - din soluția de sol pentru fiecare placă. Găsiți numărul de bacterii cultivabile în gramul original de sol, făcând media rezultatelor obținute de la fiecare placă numărătoare.