Conţinut
- Ce este ADN-ul recombinant?
- Metode de construcție a ADN-ului recombinant
- Clonarea și utilizarea secvențelor ADN recombinant
Ce este ADN-ul recombinant?
ADN-ul recombinant este o secvență ADN care a fost creată artificial în laborator. ADN-ul este celulele șablon utilizate pentru a produce proteinele care alcătuiesc organisme vii, iar dispunerea bazelor de azot de-a lungul unei catene de ADN determină ce proteine sunt formate. Prin izolarea bucăților de ADN și recombinarea lor cu alte secvențe, cercetătorii sunt capabili să cloneze ADN-ul în bacterii sau alte celule gazdă și să producă proteine utile, cum ar fi insulina. Clonarea permite studiul mult mai ușor al secvențelor particulare de ADN, deoarece produce o cantitate mare de ADN care poate fi apoi modificat și analizat.
Metode de construcție a ADN-ului recombinant
Transformarea este un proces prin care un segment de ADN este introdus într-o plasmidă - un mic cerc auto-replicant de ADN. ADN-ul este tăiat folosind enzime de restricție. Aceste enzime sunt produse în celulele bacteriene ca mecanism defensiv și țintesc anumite situri de pe o moleculă de ADN și o distrug. Enzimele de restricție sunt deosebit de utile, deoarece creează „capete lipicioase” pe segmentele ADN-ului. Ca și Velcro, aceste capete lipicioase permit ADN-ului să se unească ușor cu segmente complementare.
Gena de interes și plasmidele sunt expuse la aceeași enzimă de restricție. Acest lucru creează multe molecule diferite. Unele sunt plasmide care conțin gena de interes, altele sunt plasmide care conțin alte gene, altele sunt două plasmide împreună. Plasmidele sunt apoi reintroduse în celulele bacteriene, unde se reproduc, iar molecula de ADN recombinant căutată este identificată prin diferite tipuri de analiză. De exemplu, dacă plasmida este împărțită la o genă anume, oamenii de știință pot căuta celule care nu exprimă acea genă și identifică astfel recombinarea cu succes.
Transformarea non-bacteriană este în esență același proces, dar folosește celule non-bacteriene ca gazde. ADN-ul poate fi injectat direct în nucleul unei celule gazdă. Cercetătorii pot, de asemenea, să bargă o celulă cu particule de metal microscopice care au fost acoperite cu ADN.
Transfecția este foarte asemănătoare cu transformarea, dar fagurile sunt utilizate în locul plasmidelor. Un fag este un virus care infectează bacteriile. Atât fagii cât și plasmidele sunt ideale pentru acest proces, deoarece se vor reproduce rapid în interiorul unei celule bacteriene.
Clonarea și utilizarea secvențelor ADN recombinant
După ce cercetătorii au identificat celulele bacteriene particulare care conțin secvența recombinantă, ele pot crește acele celule într-o cultură și pot genera cantități mari de genă. Este dificil să obții celulele bacteriene să genereze de fapt o proteină dintr-o celulă gazdă umană sau animală, dar există modalități de modificare a expresiei genice pentru a face o astfel de producție mai ușoară. Dacă celulele gazdă sunt utilizate ca celule gazdă (ca în transformarea nonbaterială), celulele vor avea mai puține probleme de exprimare a genei recombinante.
Odată ce genele sunt clonate în număr mare, ele pot fi apoi stocate în bibliotecile ADN, secvențiate și studiate. Tehnologia ADN recombinantă a permis multe descoperiri importante în medico-legale, studiul bolilor genetice, al agriculturii și al produselor farmaceutice.