Conţinut
- TL; DR (Prea lung; nu a citit)
- Tampon și sare
- Detergenți dizolvați
- Agenți și Inhibitori Chelating
- Liza alcalină
Lyse este un cuvânt care provine din limba greacă și înseamnă doar „a împărți” sau „a izbucni”. Aproape, termenii se referă la ceea ce se întâmplă cu celulele într-un tampon de liză, o soluție care le deschide pentru a-și extrage conținutul. Oamenii de știință folosesc tampoane de liză atunci când extrag ADN sau proteine din celule pentru analiză, în special în cazul bacteriilor. Tipul de tampon de liză celulară variază în funcție de tipul de experiment, deși următoarele sunt câteva alegeri comune.
TL; DR (Prea lung; nu a citit)
Tampoanele de liză ajută la spargerea celulelor deschise, astfel încât conținutul acestora poate fi accesat sau eliminat. Unele exemple includ săruri, detergenți, agenți de chelare și inhibitori și unele substanțe chimice alcaline.
Tampon și sare
Tampoanele stabilizează pH-ul în timp ce celulele se divid. Tris-HCL este unul dintre cele mai comune substanțe chimice pentru tamponarea la pH 8. HEPES este un alt produs tampon comun în aceste experimente. Sarea cu clorură de sodiu poate crește, de asemenea, puterea ionică, concentrația totală a solutelor din afara celulelor. Acest ultim punct are o oarecare importanță, deoarece apa poate difuza pe membranele celulare de la regiuni cu concentrație scăzută de solut la regiuni cu concentrație mare de solut.
Detergenți dizolvați
Detergenții dizolvă membranele celulare astfel încât conținutul celulelor să poată scăpa. Structura moleculară are și amfipatică (adică, molecule cu un capăt care interacționează ușor cu moleculele de apă, în timp ce celălalt capăt hidrofob sau „temător de apă” nu). Ele pot dizolva grăsimile formând micelele, mici grupuri în care cozile hidrofobe ale moleculelor de detergent îndreaptă spre interior spre moleculele de grăsime. Detergenții obișnuiți includ sulfatul de sodiu dodecil sau SDS, NP-40 și tritonX.
Agenți și Inhibitori Chelating
Tampoanele de liză includ, de regulă, agenți de chelare precum acidul etilenediaminetetraacetic (EDTA) sau acidul tetraacetic de etilenglicol (EGTA). Aceste substanțe chimice se leagă de ionii metalici cu două sarcini pozitive (de exemplu, magneziu și calciu), ceea ce le face indisponibile pentru alte reacții. Multe ADN-uri (proteine care mestecă ADN-ul) și proteaze (proteine care tranșează alte proteine) au nevoie de ioni de magneziu pentru a funcționa, astfel încât, privându-i de acest ingredient cheie, EDTA și EGTA ajută la reducerea nivelului de protează sau activitate ADN-ului. Cu toate acestea, nu exclud complet, iar unele proteaze nu depind de cofactorii de magneziu, astfel încât tampoanele de liză includ uneori și substanțe chimice numite inhibitori de protează, care se leagă de proteaze și le împiedică să funcționeze corect.
Liza alcalină
Liza alcalină, o tehnică foarte comună pentru purificarea plasmidelor de bacterii, implică trei soluții. Primul conține glucoză, tampon tris-HCL, EDTA și ARN-uri. Glicemia creează o concentrație ridicată de solut în afara bacteriilor, astfel încât acestea devin un pic mai fragile, ceea ce le face mai ușoare pentru a liza. EDTA și tris-HCL funcționează așa cum s-a descris deja, în timp ce ARN-ul va mesteca orice ARN din interiorul celulei pentru a-l scoate din cale. Cea de-a doua soluție de fapt lisează celulele. Acesta conține detergent SDS și NaOH, care ridică pH-ul până la 12 sau mai mult, denaturand proteinele din interiorul celulei și determinând ADN-ul să se separe în catene unice. A treia soluție conține acetat de potasiu pentru a restabili pH-ul la un nivel mai neutru, astfel încât catenele ADN plasmidice pot reveni. Între timp, proteinele denaturate se aglomerează și precipită, în timp ce ionii de dodecil-sulfat se reunesc cu ionii de potasiu pentru a forma un compus insolubil, care de asemenea precipită din soluție.