Conţinut
Spectrofotometria este un instrument neprețuit în chimie și biologie. Ideea de bază este simplă: diferite substanțe absorb radiația electromagnetică / lumină mai bine la unele lungimi de undă decât la altele. De aceea, unele materiale sunt transparente, în timp ce altele sunt colorate, de exemplu. Când străluciți o lungime de undă dată printr-o soluție, cu cât concentrația este mai mare, cu atât mai multă lumină va absorbi. Pentru a calcula concentrația, trebuie să comparați citirea cu citirile pentru standardele de concentrare cunoscute. Procedura de mai jos este o procedură destul de generică scrisă cu un laborator de predare a chimiei, dar poate fi modificată și pentru alte setări.
Ca întotdeauna atunci când lucrați într-un laborator, puneți-vă ochelarii, mănușile și haina cu mâneci lungi pentru a vă asigura propria siguranță.
Strângeți becul de cauciuc pentru a-l goli de aer, apoi așezați-l deasupra pipetului dvs. gradat și lăsați becul să se relaxeze, astfel încât să aspire apa în conductă. Apoi, scoateți becul și acoperiți partea de sus a pipetei cu degetul; acest lucru va sigila pipeta astfel încât soluția din interior să nu curgă până când degetul este îndepărtat. Ridicați ușor marginea degetului pentru a lăsa o mică soluție să iasă din pipet, până când atingeți volumul dorit. Practicați cu puțină apă și un pahar pentru a obține o idee despre modul în care funcționează conducta absolvită. Linkul din secțiunea Resurse are un clip pentru a vă arăta cum să utilizați o pipetă în cazul în care nu ați mai lucrat cu una înainte.
Etichetați 5 epruvete ca standarde 1-5. Le puteți eticheta folosind o bandă de mascare și un stilou sau folosind un marker pentru ștergere uscată.
Alege cinci concentrații pentru standardele tale. Doriți ca concentrațiile standard să fie separate una de cealaltă aproximativ același interval - de exemplu, 0,1 molar, 0,2 molar, 0,3 mol, etc. - și aproximativ în același interval ca cel pe care îl așteptați necunoscutul dvs. Deocamdată, utilizați următoarele cinci concentrații, dar nu uitați că va trebui să le modificați atunci când efectuați propriul experiment:
Standard 1: 0,1 molar Standard 2: 0,2 molar Standard 3: 0,3 molar Standard 4: 0,4 molar Standard 5: 0,5 molar
Apoi, luați soluția standard 1 molar și adăugați următoarele cantități la eprubetele 1-5. Nu uitați, aceste sume sunt calculate folosind concentrațiile enumerate mai sus, deci trebuie să le modificați după cum este necesar atunci când efectuați propriul experiment.
Standard 1: 0,8 mililitri Standard 2: 1,6 mililitri Standard 3: 2,4 mililitri Standard 4: 3,2 mililitri Standard 5: 4 mililitri
Clătiți conducta gradată, apoi transferați următoarele cantități de apă deionizată:
Standard 1: 7,2 mililitri Standard 2: 6,4 mililitri Standard 3: 5,6 mililitri Standard 4: 4,8 mililitri Standard 5: 4,0 mililitri
Practic, ideea este de a aduce cantitatea de soluție din fiecare tub până la 8 mililitri.
Acoperiți fiecare tub standard cu parafilm și inversați-le pentru a le amesteca.
Marcați alte cinci epruvete ca „1-5 necunoscute”. Adăugați aceleași cantități din soluția dvs. necunoscută sau de testare pe care ați folosit-o cu soluția 1 molar pentru standarde. Cu alte cuvinte, necunoscutul 1 va conține 0,8 mililitri de soluție de testare și 7,2 mililitri de apă, necunoscutul 2 va conține 1,6 mililitri de soluție de testare și 6,4 mililitri de apă, etc.
Cap de fiecare necunoscut cu parafilm și inversați cu grijă pentru a amesteca.
Porniți spectrofotometrul și lăsați-l să se încălzească. Durata necesară va depinde de model și de producător.
Setați lungimea de undă pe spectrofotometru. Lungimea de undă va depinde de tipul de substanță chimică din experimentul dvs. Deocamdată, presupuneți 500 nm, deși amintiți-vă că va trebui să schimbați acest lucru pentru diferite experimente.
Calibrați-vă spectrofotometrul. Procedura de calibrare va varia în funcție de dispozitivul pe care îl utilizați. Pentru Spectronic 20, un model obișnuit în laboratoarele de predare, veți ajusta mai întâi aparatul astfel încât acesta să citească „0 la sută T” atunci când nu este încărcată nicio cuvă, apoi o reglați astfel încât să citească „100% T” atunci când o cuvă goală conține deionizată apa se încarcă numai. Aceste proceduri pot varia în funcție de tipul de mașină pe care îl utilizați, așa că consultați instrucțiunile producătorilor pentru detalii.
După calibrarea utilajului, luați eprubetă standard 1 și turnați conținutul într-o cuvă curată până ajung la linia de umplere. Ștergeți cuva cu un kimwipe pentru a îndepărta degetele sau alte murdăriri. Introduceți cuva în spectrofotometru și înregistrați „% T”.
Repetați această procedură pentru toate cele 10 probe. FIE CERTAȚI să curățați cuva între eșantioane pentru a vă asigura că rezultatele dvs. sunt cât se poate de precise.
Preiați rezultatele pentru standardele dvs. și introduceți-le într-o foaie de calcul / program grafic precum Excel sau OpenOffice.
Folosind programul cu foi de calcul, împărțiți 100% la fiecare din valorile „% T” pentru standarde, apoi luați jurnalul rezultatului. Acest calcul vă va oferi absorbanța. Dacă introduceți formula, programul dvs. de foi va face calculul pentru dvs.
Exemplu: Dacă% T este 50.6, formula introdusă în programul foii de calcul ar fi următoarea:
jurnal (100 / 50.6)
Programul foii de calcul va face aritmetica.
Faceți același lucru pentru toate cele cinci valori necunoscute / experimentale.
Grafică valorile de absorbție pentru toate cele cinci standarde, cu concentrație pe axa x și absorbanță pe axa y. Utilizând programul foii de calcul, potriviți o ecuație liniară acestui grafic. Ecuația va fi de forma y = mx + b. Majoritatea programelor cu foi de calcul vor avea o funcție de regresie liniară. Consultați manualul utilizatorilor pentru programul dvs. de foi de calcul pentru detalii despre utilizarea modului de regresie liniară.
Ia ecuația pentru linia cea mai potrivită din programul foii de calcul și rezolvă-o pentru y scăzând b din ambele părți și împărțind ambele părți cu m. Rezultatul va arăta astfel:
(y - b) / m = x
unde b și m sunt valori găsite de programul dvs. de foi de calcul.
Verificați valorile de absorbție pentru necunoscute și alegeți trei care se încadrează în aceeași gamă ca standardele. Utilizați aceste trei valori de absorbție pentru calculele rămase. Dacă toate cele cinci se încadrează în aceeași gamă ca standardele, le puteți utiliza în schimb pe toate cele cinci, dar trebuie să utilizați cel puțin trei.
Conectați fiecare dintre cele trei valori de absorbție la ecuația dvs. în loc de y. Nu uitați că ecuația dvs. a fost în următoarea formă:
(y - b) / m = x
Deci, veți dori să conectați valoarea de absorbție pentru fiecare necunoscut în ecuația în locul y, apoi calculați x. Puteți utiliza programul cu foi de calcul pentru a face acest calcul pentru dvs. și a-l face mai rapid. Ați calculat acum concentrația substanței chimice de interes în trei dintre necunoscutele dvs. diluate. Soluția inițială a fost diluată pentru a pregăti aceste necunoscute, deci trebuie să acționați înapoi și să calculați concentrația soluției originale pe baza factorului de diluare.
Fiecare eșantion necunoscut pe care l-ați introdus în spectrofotometru a fost diluat cu o cantitate diferită. În consecință, ar trebui să împărțiți acum concentrația pe care ați calculat-o pe baza absorbanței pentru fiecare citire necunoscută după următoarele:
Necunoscut 1: Împărțiți la 0,1 Necunoscut 2: Împărțiți la 0,2 Necunoscut 3: Împărțiți la 0,3 Necunoscut 4: Împărțiți la 0,4 Necunoscut 5: Împărțiți la 0,5
Nu uitați, însă, că aceste cifre se bazează pe presupunerea că utilizați diluțiile prezentate mai sus. Nu uitați să modificați aceste valori dacă v-ați diluat eșantioanele cu o cantitate diferită.
Adăugați rezultatele împreună și împărțiți-le după numărul de rezultate. Acest lucru vă va oferi o medie. Raportați acest număr ca fiind constatarea dvs. pentru concentrarea soluției originale.