Conţinut
Colorația Gram este o procedură de colorare diferențială care arată care sunt bacteriile Gram-pozitive sau Gram-negative pe baza culorii petei lor. Alcoolul acetonic este un reactiv utilizat în acest proces pentru a asigura diferențierea culorii. Bacteriile gram-pozitive au un strat gros de peptidoglican și colorați violet, în timp ce microorganismele Gram-negative au un strat de peptidoglican puțin până la niciun roz și nuanțe de roz.
Violet primar Stain-Crystal
Odată ce un tobogan de probă bacteriană este pregătit, cristal violet este utilizat pentru a colora prima probă. În acest moment, atât bacteriile Gram-pozitive, cât și cele Gram-negative vor apărea violet. De obicei, violetul de cristal este aplicat pe lamă timp de 30 de secunde înainte de a spăla excesul de pete cu apă. Violeta de cristal poate adera puțin straturile de peptidoglican, astfel încât nu toată pata primară va fi spălată cu apa.
Mordant-Iod
Iodul este apoi adăugat la probă timp de un minut. Acționează ca un mordant, care servește la fixarea coloranților într-un proces de colorare. Iodul îndeplinește această funcție, legându-se de violetul de cristal și creând un complex insolubil, care aderă mult mai bine la stratul gros de peptidoglican găsit în celulele bacteriene Gram-pozitive decât doar violetul de cristal singur. Nu există o etapă de spălare cu apă după adăugarea iodului.
Decolorant-alcool
Acetonă sau alcool etilic pot fi utilizate ca agent de decolorare. Alcoolul dizolvă lipidele găsite în membrana celulară externă a bacteriilor Gram-negative, permițând complexului cristal-violet iod să se scurgă din stratul de peptidoglican mai subțire. Se adaugă alcool timp de 10 până la 20 de secunde; se toarnă pe lamă până când tot iodul este spălat și scurgerea este incoloră. În acest moment al procesului de colorare Gram, bacteriile Gram-negative sunt incolore, în timp ce bacteriile Gram-pozitive păstrează încă cristalul violet. Odată terminat, toboganul trebuie clătit cu apă pentru a opri efectul de decolorare.
Contracolora-Safraninul
Safranina este apoi adăugată pentru a crește vizibilitatea și contrastul cu bacteriile Gram-negative incolore. Pata face ca aceste bacterii să apară roz sub microscop. Deoarece pata este adăugată la întregul eșantion, de asemenea, pătează bacterii Gram-pozitive, dar întunericul violetului de cristal ascunde culoarea roz mai deschisă a safraninei. După ce proba de diapozitive a fost inundată cu safranină timp de aproximativ un minut, apa este folosită pentru a spăla orice pată în exces care nu a aderat la celulele bacteriene.