Conţinut
Cromatografia lichidă de înaltă performanță (HPLC) este o tehnică de laborator folosită pentru separarea și identificarea compușilor. Este un tip de cromatografie pe coloană care se bazează pe polarități diferite ale compușilor într-o soluție pentru a le separa. HPLC diferă de cromatografia standard pe coloană, deoarece folosește presiunea pentru a forța soluția prin coloană mai rapid și, prin urmare, produce rezultate mai rapide și, uneori, mai precise. Scopul este de a separa compușii în coloană și de a-i ieși separat.
Coelution
Datorită vitezei HPLC și se bazează pe polarități diferite ale compușilor, doi compuși cu structură și polarități similare pot ieși din aparatul de cromatografie în același timp sau aproape în același timp. Aceasta este cunoscută sub numele de coeluție. Coeluția face să se determine exact ce porțiune a amestecului eluat în ce punct dificil.
Compuși adsorbiți
HPLC utilizează de obicei o coloană de sticlă umplută cu margele din materiale diferite. Amestecurile care sunt forțate prin coloană au substanțe chimice care se leagă cu diferite puteri de margele. Rezistența legăturii, care depinde de similitudinea în polaritate, determină cât timp se va lega substanța chimică a mărgelei înainte de a fi eliberată. Unii compuși se leagă atât de puternic încât, în esență, nu sunt eliberați niciodată din perlele din coloană și nu sunt măsurați niciodată în soluția care iese din coloană.
Cost
Tehnicile de separare tipice de laborator implică dezvoltarea unui test, sau o metodă de separare, și apoi punerea în aplicare a testului pentru a separa compuși individuali de o soluție. Cu toate acestea, acest lucru duce de obicei la soluții multiple care trebuie, de asemenea, să fie supuse procedurilor, ceea ce duce la o creștere exponențială a complexității. Deși adesea HPLC poate simplifica și accelera acest proces, costul dezvoltării unui aparat HPLC poate deveni considerabil. Dezvoltarea unui aparat HPLC, deși este mult mai eficient, este mult mai costisitoare decât dezvoltarea altor analize pentru separarea compușilor. Acest lucru face să nu fie viabil din punct de vedere financiar pentru multe laboratoare private mici.
Complexitate
HPLC nu este folosit doar pentru a separa compuși simpli, ci este de asemenea utilizat pentru a izola anumite proteine dintr-un amestec celular. În acest caz, mărgelele din coloană sunt de obicei acoperite cu un anticorp specific proteinei pe care trebuie să o colectezi. Proteinele leagă anticorpii și soluția rămasă este trecută prin coloană, apoi proteinele sunt eliberate folosind o altă soluție și colectate. Acest lucru necesită un tehnician de înaltă calificare pentru a monitoriza coloana în permanență și pentru a se asigura că procesul se desfășoară exact așa cum a fost planificat.