Conţinut
- Cum funcționează electroforeza cu gel
- O procedură de bază a electroforezei
- Determinarea lungimilor fragmentelor necunoscute
Când vine vorba de măsurarea lungimii fragmentelor de ADN, care sunt mult mai mici decât celulele, microbiologii au nevoie de un truc, iar cea mai convenabilă este electroforeza pe gel. Această metodă se bazează pe faptul că fragmentele de ADN sunt încărcate și este o alternativă la metode mai scumpe, cum ar fi cristalografia cu raze X, care a fost responsabilă pentru descoperirea structurii cu dublă helixă a ADN-ului.
Cum funcționează electroforeza cu gel
Deoarece moleculele de ADN sunt încărcate, acestea sunt afectate de un curent electric. Atunci când le setați într-un gel neutru și plasați un curent peste gel, moleculele migrează spre electrodul pozitiv (anod). Deoarece moleculele de ADN de dimensiuni diferite poartă aceeași încărcare, cele mai mici călătoresc mai rapid, astfel că acest proces separă moleculele în benzi care pot fi comparate cu probe de mărimi cunoscute.
O procedură de bază a electroforezei
Gelul este obținut de obicei din agaroză, un polizaharid care, atunci când este încălzit într-o soluție tampon, formează un gel semisolid, ușor poros. La un capăt, gelul formează mici indentări numite puțuri în care cercetătorul plasează probele de ADN în studiu, împreună cu probe de referință de lungime cunoscută, numite scară ADN. Lungimile fragmentelor de scară au fost stabilite în prealabil printr-o altă metodă, cum ar fi cristalografia cu raze X.
Când gelul este cufundat într-o soluție conductoare și se aplică tensiune, fragmentele încep să migreze prin gel - cele mai mici mai întâi și cele mai mari, mai lente din spate. În cele din urmă se formează în benzi similare spectrului în funcție de dimensiune.
Odată ce acest lucru se întâmplă, cercetătorul oprește puterea, infuzează gelul cu un colorant care leagă DVA și examinează specimenele sub lumină ultravioletă. Folosind scara ca referință, cercetătorul poate determina dimensiunea fiecărui fragment dintr-o bandă vizibilă. Doar benzile sunt vizibile - fragmentele individuale de ADN sunt prea mici pentru a le vedea.
Determinarea lungimilor fragmentelor necunoscute
Șansele nu sunt fiecare bandă dintr-un eșantion pereche cu o bandă pe scară, așa că pentru a determina dimensiunile acestor fragmente necunoscute, oamenii de știință desenează de obicei un grafic. Pe axa x este distanța parcursă de fiecare bandă în scară în milimetri, în timp ce pe axa y este dimensiunea fiecărei benzi. Când punctele sunt conectate printr-o curbă, dimensiunea oricărei benzi poate fi extrapolată de la curbă după măsurarea distanței parcursă de acea bandă în milimetri.