Conţinut
Un spectrofotometru este utilizat pentru a determina concentrația anumitor compuși, cum ar fi proteine, într-o soluție. În general, o lumină strălucește printr-o cuvă umplută cu o probă. Cantitatea de lumină care este absorbită de probă este măsurată. Întrucât compușii absorb lumina în diferite intervale spectrale, trebuie analizată lungimea de undă potrivită pentru analiză. Există numeroase moduri de a calcula concentrația eșantioanelor necunoscute prin spectrofotometrie, cu toate acestea, utilizarea standardelor de referință oferă cea mai bună precizie. Mai mult, standardele indică, de asemenea, dacă spectrofotometrul funcționează defectuos sau alte probleme cu analiza.
Calcularea prin ecuații de linie dreaptă
Analizați standardele de referință la începutul analizei. Standardele sunt concentrații cunoscute și sunt utilizate pentru calibrarea echipamentelor și verificarea exactității. Toate eșantioanele ar trebui să se încadreze în intervalul de lucru al standardelor. Dacă nu, atunci eșantioanele vor trebui diluate sau concentrația standardelor va crește.
Realizați un grafic de difuzare sau un grafic liniar cu citirea standardului de concentrație și absorbție. Concentrația va fi pe axa y, absorbția pe axa x. De exemplu, standardele sunt de 1 ppm, 2,5 ppm și 5 ppm. Absorbența dată a fost de 1 ppm = 0,25, 2,5 ppm = .5 și 5 ppm = 0,75.
Formatați linia de tendințe pentru a afișa o ecuație pe grafic. Ecuația va arăta formula y = mx + b. De exemplu, folosind standardele din pasul 2, ecuația este y = .1224x + 0.1531. Majoritatea liniilor de trend sunt interceptate la zero, dar depinde de metoda analitică și de valoarea pătrată R.
Analizați eșantioanele necunoscute și înregistrați citirile de absorbție.
Utilizați ecuația (y = mx + b) pentru a determina concentrația probelor.
Înțelegerea ecuației drepte
Lasă „Y” să egaleze concentrația. Pentru aceasta se va rezolva.
Lăsați „X” să egaleze absorbția probei. Aceasta este absorbția măsurată de spectrofotometru.
Permiteți „” să egaleze panta și „b” să egaleze interceptarea y. Ambele sunt date, însă dacă linia de tendință a fost forțată prin 0, atunci „b” va fi 0.
Rezolvați concentrarea. Folosind exemplul din etapa 3, înlocuiți „x” ca o absorbție dată de .563. Prin urmare:
y = .1224 (.563) + 0,1531
y (concentrație) = .222011