Conţinut
Biochimia studiază molecule precum ADN, ARN și proteine. Tehnicile de blotting sunt cele pe care oamenii de știință le folosesc pentru a separa aceste tipuri de molecule. În celule, ele există ca amestec. Blotting permite cercetătorilor să găsească o proteină printre mulți, precum un ac într-un cătun de fân. Blotting se face, în general, lăsând un amestec de ADN, ARN sau proteine să curgă printr-o placă de gel. Acest gel permite moleculelor mici să se miște mai repede decât cele mai mari. Moleculele separate sunt apoi presate pe o membrană, care ajută la mutarea moleculelor din gel pe membrană. Moleculele se lipesc de membrană, dar rămân în aceeași locație, una de cealaltă, ca și cum ar fi încă în gel.
Western Blot
Western blotting este o tehnică obișnuită pentru separarea proteinelor după dimensiuni, dar în coloane drepte. Aceste coloane paralele permit cercetătorilor să compare cantitatea unei proteine pe diferite eșantioane care sunt rulate chiar unul lângă celălalt, cum ar fi benzile de bowling. De exemplu, dacă ați testa efectul diferitelor cantități ale unui medicament asupra creșterii celulare, ați trata patru grupuri diferite de celule cu o cantitate diferită de medicament. Apoi, puteți sparge celulele deschise și rula proteinele fiecărui grup pe benzi separate pe un gel. Răspândirea proteinelor în acest fel vă permite să vedeți ce face o concentrație crescândă de medicamente pentru o anumită proteină.
Northern Blot
Northern blotting este utilizat pentru a detecta ARN. Celulele pot fi rupte pentru a-și elibera ARN-ul. ARN din diferite tipuri de celule poate fi rulat pe benzi separate pe un gel. Gelul răspândește diferit ARN după dimensiune. Aceste rânduri corecte și paralele de ARN permit unui cercetător să compare ce tip de celule are cât de mult ARN. Această metodă permite unui cercetător să determine dacă celulele dintr-o anumită boală au mai mult din acest ARN sau mai puțin din acel ARN. Blotting nordic poate dezvălui cum funcționează o boală la nivelul producției de ARN.
Southern Blot
Southern blotting este tehnica originală de blotting, care a pornit sistemul de denumire. A fost inventat de Edwin Southern. Southern blot este utilizat pentru a detecta cantitatea de ADN dintr-un amestec. La fel ca în cazul proteinei și ARN, ADN-ul unei celule poate fi eliberat atunci când celula este spartă. Southern blotting separă ADN-ul de diferite tipuri de celule după mărime. ADN-ul de la fiecare probă este răspândit pe benzi paralele înguste. Piese individuale de ADN pot fi detectate folosind o sondă radioactivă sau fluorescentă, care este proiectată să se lege doar de acea bucată de ADN. Semnalul de energie provenit de la o sondă radioactivă sau sclipirile de lumină provenite de la un semnal fluorescent, spun cercetătorilor cât de mult din acea bucată de ADN se află în fiecare probă.
Alte pete
Cele trei tehnici principale de blotare - vestul, nordul și sudul - au fost modificate în moduri diferite pentru a detecta molecule ușor diferite. Western blot vs Southern blot, de exemplu. detectează proteine și respectiv ADN. Fiecare tehnică modificată este realizată în general în mod obișnuit, dar folosește o metodă diferită pentru a detecta molecula care este răspândită pe benzile paralele. Blots Southwestern detectează molecule de proteine lipite de ADN. Blots de nord-vest detectează molecule de proteine lipite de ARN. Farwestern blots detectează molecule de proteine lipite de alte proteine.